IHC(Immunohistochemistry)，其实就是免疫组织化学的简称，是以免疫学的抗原-抗体反应为基础，采用标记特异性抗体对组织内相应的抗原进行定位、定性和半定量检测的一项组织化学显色反应。因为这项技术主要用于研究和观察细胞内的一些成分，故又称作ICC(Immunocytochemistry)，即：免疫细胞化学。所有能作为抗体或半抗原的物质，都可以成为它的研究对象。

　　因为其特异性高，敏感性强，方法步骤统一、形态、功能和代谢结合密切等方面的优势，使得其成为临床病理不可或缺的手段。

　　IHC/ICC最常见的中类型：

　　1、传统直接法和新型直接法

　　传统直接法其实就是将已知的特异性抗体和标记物结合(也就是)，再通过标记抗体与标本内的相应抗原相结合，然后，再通过显微镜(或电子显微镜)来观察抗原存在部位标记性抗体即可。这种方法特异性强，非特异性的反应相对较少，技术操作简单，但是必须标记每一种特异性抗体，而且只能检测一种抗原，敏感性较差，同时，反应的信号也较小;

　　新型直接法则是以一种具有惰性的多聚化合物为骨架，而后将特异性抗体与HRP结合在骨架上所形成的HRP-葡聚糖特异性抗体的复合物，通过与酶反应，可以通过光镜下观察特异性阳性结果。这种方法的感染性强，背景无染色，极大程度上缩减了试验的时间，但是，商品化的EPOS品种不多，且价格较为昂贵;

　　2、传统间接法和新型间接法

　　传统间接法是用未标记的一抗与标本内的抗原物质结合，而后在采用标记过后的二抗与一抗结合，而后通过显微镜观察其有色的阳性反应物。这个方法增强了反应信号，敏感性比直接法提升了3-4倍，但是特异性要低于直接法，容易出现非特异性染色，且步骤繁琐，染色所需的时间更长;

　　新型间接法是将标本的抗原与一抗结合后，然后与标记有多聚化合物的二抗相结合，经酶触反应进行显色定位(也叫EnVision法)。这个方法中的每一个EnVision复合物包含70个酶分子和10个二抗分子，提升了与一抗结合的机会，操作简单，可以说是先解决最优化的方法;

　　3、酶桥法和PAP法

　　酶桥法是制备同种属的特异性一抗和抗酶抗体(三抗)，利用二抗作为桥梁将三抗与一抗连接起来，三抗的标记酶经酶促反应，即可在抗原位置上呈现有色阳性反应产物。这种方法敏感性高，可节约一抗的用量，但会造成较高的非特异性染色;

　　PAP法则是借助二抗的桥梁作用，将PAP/ALP复合物连接在与组织抗原结合的一抗上。PAP复合物由3分子酶和2分子的抗酶抗体构成，抗酶抗体和一抗为同种属动物的IgG，经相应的酶促反应，可通过显微镜观察到阳性结果。这种方法抗体活性高，灵敏度高，背景染色低，但是步骤较多，需要较长的染色时间;

　　4、ABC法和SP法

　　ABC法的关键是ABC复合物，由一个卵白素分子结合3个生物素化的过氧化物酶分子构成。合物，通过ABC复合物中卵白素与生物素化抗体结合，经过组织化学的酶显色反应，达到检测组织或细胞原位内抗原的目的。这种方法敏感性高，特异性强，操作方法简单，节省染色时间，但是会引起非特异性性反应增强的现象;

　　SP法即链霉抗生物素-生物素法，与ABC法相似，通过采用链霉抗生物素蛋白与生物素化酶(HRP)相结合，形成链霉抗生物素-生物素化酶复合物，这种复合物再与生物素标记的二抗结合，通过酶的显色反应检测抗原存在的部位。这种方法可有效降低内源性生物的非特异性反应程度，敏感性比ABC法增加了4-8倍;

　　操作流程入下图：

　　更多知识，敬请关注武汉普健生物!