Co-IP是用于研究蛋白质相互作用的一种手段,可对两种已知的蛋白互作进行验证,也可以研究总蛋白中可以与靶蛋白互作的未知蛋白。其方法是当靶蛋白A与目标蛋白B形成“靶蛋白-目标蛋白”复合物,使用靶蛋白的特异性抗体与复合物进行孵育,促进免疫复合物的形成。然后用proteinA/G耦合的琼脂糖凝胶,将抗体/抗原复合物提出来。结合Western blot或者质谱技术,达到对两种蛋白是否存在相互作用进行定性分析。
1. 样本准备,细胞或者组织裂解;
2. 蛋白提取与定量;
3. 蛋白与抗体的免疫反应(提供input以及IgG对照);
4. 免疫沉淀物,WB分析;
5. 质谱分析,可选。
1. 细胞、组织、蛋白溶液等样本;
2. 目的蛋白相关信息;
3. 目的蛋白抗体;
4. 如需要构建基因过表达载体,需提供载体及相关信息。
1. 免疫沉淀蛋白样本;
2. 完整的实验报告,包括WB分析结果等。
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